大肠杆菌作为基因工程受体菌的特点:
1、发酵产品具有高浓度、高转化率和高产率。
2、菌株能利用常用的碳源,并可进行连续发酵。
3、菌株不是致病株,也不产内毒素。
4、代谢控制容易进行。
5、能进行适当的DNA重组,并且稳定。
扩展资料:
检验方法:
1、发酵法:
这种方法主要是在44.5℃下的培养基上进行大肠杆菌的培养,该培养基含有荧光底物,需要培养 24 h。
然后对荧光底物进行释放,需要采用葡萄糖醛酸进行,让培养基能够在紫外光的照射下发出荧光。采用这样的方式方法,还可以进行统计学估计原来样品中的菌落。
主要步骤包括发酵、分离培养、二次发酵、显微镜观察等。
2、滤膜法:
该方法主要过程:加入 10 mL 左右的无菌水于滤器中,然后掺入一些无菌水进行清洁滤器的内壁,再进行过滤,将滤膜放在 M-FC 培养基中,两者之间不能够有气泡,然后进行密封。
存放温度为 44.5℃,存放时间约 24 h,直到大肠杆菌的菌群变成蓝色或蓝绿色。然后记录数据,估算每一单位的水溶液菌群数量,然后进行大肠杆菌量值的换算。
3、平板计数法:
用无菌吸管吸取稀释度样品1 mL,该样品与乳糖胆盐发酵类似,然后将其放入无菌培养皿中,再加入温度于 45℃下的 CDLJ JD 显色培养基中10 mL的量,并进行培养皿中溶液均匀混合。
可以通过快速转动培养皿的方式,等溶液凝固以后,加入5 mL左右,然后快速摇晃培养基,使其可以均匀覆盖平板表面,等其凝固以后,翻转培养基,在温度37℃中培养24 h左右,然后观察其形态,颜色等变化。
除此之外,平行设置两个稀释度培养基,步骤是先稀释样本,通过稀释后,微生物可以分散为单个细胞,然后进行一定环境条件下培养,直到其长成菌落为止,然后进行计算大肠杆菌的数量,通过稀释度和样本数量进行计算。
4、免疫磁珠法:
该分离技术的主要原理是以磁珠为载体和抗体,进行抗体和磁珠的结合,然后通过磁力技术完成力学的移动,进而分离大肠杆菌。
与其他分离细菌的方式相比,这样的方式方法具有一定的优点,该技术可以提升样本中病原性弧菌的检测成功率,并且免疫磁珠技术可以于不同菌种中对不同的微生物进行处理,进而在很大程度上提高检测效率 。
5、自动化仪器检测法:
主要是运用免疫自动化分析仪,该技术产生并运用于1970年。
随着科技的发展和进步,自动化仪器检测技术应用非常广泛,并且操作起来非常方便,可以节约很多时间,其受干扰的程度较小,可以节省人力物力的投入,也可以提高检测的精确度。
在现阶段的发展过程中,自动酶的免疫检测体系的应用非常广泛。
6、ATP生物发光法:
在近些年的发展过程中,生物发光技术应用很广泛,是一种比较快速的检测微生物的技术。
在活性细胞中,ATP是其常见的能量代谢产,可以提供细胞生理活动过程中所需的能量。并且,该技术可以在生物体内可以在一定范围内保持一定的含量。
食品中的大肠杆菌检测技术可以采用荧光光度的方法,因为生物体发光的原因是有荧光素酶的作用,产生了发光的效果。
该物质来源于北美的萤火虫体内,可以催化荧光素的氧化作用,不过,该物质性质不稳定,可以对荧光进行快速分解。另外,该检测技术结果获得过程是非常快的,并且该设备携带方便,十分适用于现场检测。
参考资料来源:百度百科-基因工程菌
参考资料来源:百度百科-大肠杆菌
优点:
1、遗传背景清楚。目标基因表达水平高,表达系统成熟完善。
2、易于培养(培养方法简单、生长快、培养周期短、抗污染能力强)、成本低,被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物。
缺点:
1、表达产物缺少饭以后的修饰(如糖基化、烷基化、磷酸化、特异性的蛋白水解加工等);同时高表达时易折叠错误导致表达产物没有活性,而且大肠杆菌本身含有内毒素和有毒蛋白,可能混在产物里,应用受限。
2、真核生物的启动子不能被原核细胞(大肠杆菌)的RNA聚合酶识别。
3、真核生物的mRNA上没有SD序列,因此不能被原核细胞核糖体结合。
4、真核生物的基因含有内含子,原核细胞缺乏见他们的转录物进行拼接加工的机制。
5、真核细胞的基因产物,往往需要翻译后加工,真核细胞缺乏翻译后加工有关的酶。
6、真核生物基因表达的蛋白质易被原核细胞蛋白酶所降解。
扩展资料:
基因工程菌应具备以下条件:
1、发酵产品具有高浓度、高转化率和高产率;
2、菌株能利用常用的碳源,并可进行连续发酵;
3、菌株不是致病株,也不产内毒素;
4、代谢控制容易进行;
5、能进行适当的DNA重组,并且稳定。
参考资料来源:百度百科-大肠杆菌
参考资料来源:百度百科-基因工程
参考资料来源:百度百科-基因工程菌
大肠杆菌作为基因工程受体菌具有哪些特点
遗传背景清楚 ;目标基因表达水平高;表达系统成熟完善;易于培养(培养方法简单、生长快、培养周期短、抗污染能力强)、成本低;被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物.
缺点:表达产物缺少饭以后的修饰(如糖基化、烷基化、磷酸化、特异性的蛋白水解加工等);同时高表达时易折叠错误导致表达产物没有活性,而且大肠杆菌本身含有内毒素和有毒蛋白,可能混在产物里,应用受限.
真核基因在大肠杆菌中表达:
1,真核生物的启动子不能被原核细胞(大肠杆菌)的RNA聚合酶识别;
2,真核生物的mRNA上没有SD序列,因此不能被原核细胞核糖体结合;
3,真核生物的基因含有内含子,原核细胞缺乏见他们的转录物进行拼接加工的机制;
4,真核细胞的基因产物,往往需要翻译后加工,真核细胞缺乏翻译后加工有关的酶;
5,真核生物基因表达的蛋白质易被原核细胞蛋白酶所降解.
大肠杆菌作为基因工程菌的受体菌有哪些特点真和基因在大肠杆菌存在哪些障碍~
遗传背景清楚 ;目标基因表达水平高;表达系统成熟完善;易于培养(培养方法简单、生长快、培养周期短、抗污染能力强)、成本低;被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物。缺点:表达产物缺少饭以后的修饰(如糖基化、烷基化、磷酸化、特异性的蛋白水解加工等);同时高表达时易折叠错误导致表达产物没有活性,而且大肠杆菌本身含有内毒素和有毒蛋白,可能混在产物里,应用受限。
真核基因在大肠杆菌中表达:1,真核生物的启动子不能被原核细胞(大肠杆菌)的RNA聚合酶识别;2,真核生物的mRNA上没有SD序列,因此不能被原核细胞核糖体结合;3,真核生物的基因含有内含子,原核细胞缺乏见他们的转录物进行拼接加工的机制;4,真核细胞的基因产物,往往需要翻译后加工,真核细胞缺乏翻译后加工有关的酶;5,真核生物基因表达的蛋白质易被原核细胞蛋白酶所降解。
优点的话 相当多,比如代时短,易培养,研究充分,便于科研者改造,对绝大多数质粒载体适用,相关信息丰富,易表达,好多好多,所以大家都在用。但是它也存在局限性,比如表达的外源蛋白多为不可溶的(包涵体),在真核生物或病毒蛋白的表达上尤为突出,当然这些也可以通过纯化后的复性等手段使其重新获得活性,但是并不是都能够成功的。因此就有人采用枯草芽孢杆菌、酵母菌甚至是杆状病毒等其他的表达系统以期获得理想的结果。还有什么疑问,可以继续追问!
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