对于SDS-PAGE中的样品蛋白没有太大的要求，只需要其能够充分溶解或者悬浮在液体中即可。也就是说，你的蛋白应该是可溶的，或者是被你用振荡、超声、或者移液枪的吹吸打散了的。不需要用特定的溶液溶解，但是上样前需要加入1/5倍样品体积的5X载样液（Loading Buffer，62.5mMol/L Tris-HCl 8.0，2% SDS，25%甘油，0.01%溴酚蓝）并沸水加热3min左右，经12,000rpm×1min离心，取上清上样。
将样品置于1×SDS凝胶加样缓冲液中，在100 ℃加热3 min以使蛋白质变性
50 mmol/L Tris•Cl（pH 6.8）
100 mmol/L 二硫苏糖醇（DTT）
2% SDS（电泳级）
0.1% 溴酚蓝
10% 甘油
若蛋白具有由二硫键形成的高级结构，需加入巯基乙醇使二硫键还原成巯基
该缓冲液本身就是蓝色，很明显的
在SDS-PAGE电泳前，蛋白质样品应该如何处理~
这个是看你的目的了，如果你要跑还原性电泳，那么样品需要用含有β-巯基乙醇的loading buffer沸煮5分钟，这样使蛋白间的二硫键在还原剂β-巯基乙醇的作用下被打开，得到的是蛋白的一级结构。而非还原的电泳就是在loading buffer中不加入还原剂β-巯基乙醇，这样的电泳比较能够真实的反应蛋白当时的情况，比如二聚体或者多聚体之类的。
不必须加热，比如如果裂解细菌跑page，因蛋白在细菌里面，此时需要加热来裂解细胞。
一般可溶性的蛋白不必加热，加热也没关系的。
#18040608097#
生化实验:SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离混合蛋白质,天然胶与变性胶原理和应用的不同点? - ******
#匡倪# 最大的区别就在于蛋白在电泳过程中和电泳后会不会变性. 1,凝胶的配置中非变性凝胶不能加入SDS,而变性凝胶的有SDS. 2.电泳载样缓冲液中非变性凝胶的不仅没有SDS,也没有巯基乙醇. 3.在非变性凝胶中蛋白质的分离取决于它所带...
#18040608097#
SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳时为什么要在样品中加少许溴酚兰和一定浓度的蔗糖溶液 - ******
#匡倪# 江西
#18040608097#
在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中,sds,sds - page,AB,AP,TEMED分别起什么作用? - ******
#匡倪# sds:变性剂,用来变性蛋白和破坏蛋白二级结构. AB:凝胶前体 AP和TEMED用来聚合凝胶.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的英文缩写是sds-page
#18040608097#
SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的实验中.当加完分离胶后,为何要在其上加一层水? - ******
#匡倪# 这个步骤称为水封目的是隔绝空气使催化反应快速进行,进而形成凝胶,还可使分离胶上沿平直. 并且加水后,保持分离胶表面的平整性,使浓缩胶和分离胶都处于同一水平面上.
#18040608097#
SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳法中浓缩胶的作用是什么? ******
#匡倪# 在上样孔里加样的时候样品是有一定的高度的,样品里的蛋白没有站在一条起跑线上.浓缩胶的作用就是压缩样品中的蛋白质成为一条细线站在同一条起跑线上,这样影响蛋白迁移速率的因素就只有分子量的大小了,也就更有可比性了.
#18040608097#
SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳? - ******
#匡倪# SDS-PAGE用来分离蛋白质的,而且是先将蛋白的高级结构变性成1级结构,之后根据蛋白质量大小分离的. 琼脂糖是分离DNA的,原理也是根据质量大小分离
#18040608097#
名词解释 sds - page电泳 - ******
#匡倪# 在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基磺酸钠)作为载体,在电泳时,蛋白质分子的迁移速度则主要取决于蛋白质分子大小,一种区分不同分子量蛋白的电泳.
#18040608097#
SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳过程中正负极会发生什么变化 - ******
#匡倪# 奇怪的问题哦,正负极没变化呀,只是蛋白被SDS包被以后带了负电因此向正极泳动.
#18040608097#
谁知知道 sds的电泳原理啊 ******
#匡倪# 蛋白质在SDS的作用下带负电,在电场作用下在凝胶中移动,所带电荷多少与蛋白质分子量成反比例关系,分子量越大迁移速度越小
#18040608097#
SDS - PAGE电泳的原理是什么? - ******
#匡倪# 作用原理聚丙烯酰胺凝胶电泳是网状结构,具有分子筛效应,它有两种形式,一种是非变性聚丙烯酰胺凝胶,蛋白质在电泳中保持完整的状态,蛋白在其中依三种因素分开:蛋白大小,形状和电荷. 而SDS-PAGE仅根据蛋白分子量亚基的不同...
